对于高效液相色谱保留时间漂移的原因和一些相关题网上众说纷纭，那么正向色谱柱流动相变化的一些题究竟是怎么回事呢，小编为你带来详细的讲解。
高效液相色谱分析中存在两种类型的保留时间非重现性保留时间漂移和保留时间变异。前者是指保留时间仅在一个方向上变化，而后者是指保留时间波动没有固定的规律。保留时间漂移的原因包括柱平衡、固定相损失、柱污染、流动相组成变化、流动相污染和疏水性破坏。在实践中，保留时间变化通常是由色谱柱老化引起的。
1、色谱柱平衡
当高效液相色谱出现保留时间漂移时，首先要考虑色谱柱与流动相是否完全平衡。一般需要1020倍柱体积的流动相进行平衡，但如果流动相中添加少量添加剂，平衡柱需要很长时间。
2.静止相损耗
固定相的稳定性有限，即使在推荐的pH范围内使用，固定相的水解也会缓慢进行。例如，硅胶基质在pH=4时具有最高的水解稳定性。
固定相水解速率与流动相的类型和配体有关。双官能和三官能配体比单官能配体更稳定，长链键比短链键更稳定，烷基键比氰基键更稳定。
频繁的色谱柱清洗也会加速固定相的水解。
3、色谱柱污染
HPLC色谱柱是非常有效的吸附过滤器，可以过滤和吸附流动相携带的所有物质。污染源可能包括流动相本身、流动相容器、连接管、泵、进样器、密封件和样品。污染原因通常可以通过实验确定。
如果您的样品中含有强烈残留在色谱柱上的成分，这些成分可能是保留时间漂移的潜在来源。罪魁祸首通常是样品基质，可以通过样品制备（例如固相萃取）将其去除。一般来说，样品中强烈保留的组分具有较高的分子量，并且背压也会在保留时间漂移的同时或之后增加。
4.流动相组成的变化
流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因，例如流动相挥发性组分的蒸发和流动相的回收。
5.流动相污染
溶解在流动相中的少量污染物可能会慢慢积聚在色谱柱上并改变保留时间。
注水是流动相成分，很容易被污染。
6、疏水塌陷
当具有小孔径和良好端基密封的反相色谱柱使用浓度接近100的水作为流动相时，有时会发生突然的分离损失，并且样品保留可能会也可能不会显着降低。这种现象称为疏水塌陷。
一、高相液相色谱法的原理，它的流动相的作用是什么？
高效液相色谱的原理是以液体为流动相，利用高压进样系统将不同极性的单一或混合溶剂、缓冲液及其他流动相按不同比例泵入装有夹具的色谱柱中。色谱柱各组离后，进入检测器进行检测。高效液相色谱具有“四好一广”的特点。
高压由于流动相是液体，在通过色谱柱时受到较大的阻力，载液需要加压才能快速通过色谱柱。
高速分析速度快，载液流速快。它比传统的液相色谱法要快得多。分析一个样品通常需要15到30分钟。有些样本可能会在5分钟内完成，但通常不到1小时。
效率高分离效率高。选择固定相和流动相可以达到的分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效率高数倍。
灵敏度高紫外检测器可达0-01ng，进样量约L。
应用范围广高效液相色谱可以分析70%以上的有机化合物，对于高沸点、大分子、强极性、低热稳定性化合物的分离分析特别有利。扩展信息虽然高效液相色谱具有色谱柱可重复使用、样品完整、易于回收等优点，但它也有缺点，与气相色谱相比，各优点相辅相成。高效液相色谱的一个缺点是“柱外效应”。除进样器和检测器之间的色谱柱外，任何死空间中流动相流动模式的任何变化都会显着加宽色谱峰，并由于分离材料的扩散和保留而降低色谱柱效率。HPLC检测器的灵敏度低于气相色谱仪。空间排阻色谱法使用凝胶-凝胶作为固定相。尽管它们的功能与分子筛类似，但凝胶的孔径比分子筛大得多，通常在几纳米到数百纳米之间。溶质根据分子大小而不是相互作用力的差异在两相之间分离。分离仅与凝胶的孔径分布和溶质的流体动力学体积或分子大小有关。样品进入色谱柱后，与流动相一起流过凝胶的外部间隙和孔。样品中一些太大的分子无法进入凝胶孔并被排除，直接穿过色谱柱并首先出现在色谱图中，而一些非常小的分子可以进入整个凝胶孔并渗透到颗粒内部。该色谱柱具有最大的保留值并且出现在色谱图中的最后。
一般来说，反相色谱柱用于高极性样品，其中流动相的极性大于固定相，样品极性越小，保留时间越长。对于极性较小的样品，使用正相色谱柱。流动相的极性小于固定相的极性。样品极性越大，保留时间越长。当然，其他保留机制的存在，例如氢键，会改变波流时间。固定相的保持能力不同。例如，C8的保持能力比C18弱。
流动相因其溶解度、极性等不同也会影响保留时间。同时，溶液的pH值影响样品状况和保留时间。
二、液相色谱，用双流动相梯度跑程序，走空白及样品基线总是向上漂，是什么原因啊？
普通的。一般的梯度是后面的有机相增加而水相相对减少，使得在相同速率下水相的吸收小于有机相的吸收。背部成为基线。向上浮动是正常的。在典型情况下，该范围从几十个MV到1-200个MV。太多通常意味着你使用的试剂不适合梯度，或者仪器本身有题。
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